Immunological parameters of macrophages infected by methicillin resistant/sensitive Staphylococcus aureus / Parâmetros imunológicos de macrófagos frente à infecção por Staphylococcus aureus meticilina sensível/resistente

INTRODUCTION: Could changes in Staphylococcus aureus cellular walls, which are commonly associated with multidrug resistance phenotype, influence their immune evasion mechanisms? OBJECTIVE: To evaluate the microbicide response and survival of alveolar macrophages after in vitro infection with methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus. MATERIAL AND METHODS: We used 20 adult, male, albino, Wistar rats. The alveolar macrophage samples were obtained after tracheostomy and bronchoalveolar lavage. The alveolar macrophages were cultured in the proportion of 1:1 cells/ml Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium/well and isolated by plate adhesion. For the assessment of immunological parameters, four systems were established: negative control, positive control, methicillin sensitive S. aureus (MSSA) and methicillin resistant S. aureus (MRSA). RESULTS: When comparing MRSA and MSSA systems, there was no significant difference as to adhesion and phagocytosis rates, superoxide anion production and macrophage viability. By analyzing the kinetics of nitric oxide production, after 4 to 10 hours of cellular culture incubation, there was lower average production of this radical in the MRSA system when compared to MSSA. However, after 12 hours, no differences were detected between both systems. CONCLUSION: It is claimed that methicillin resistance may be a factor that influences the bacteria's ability to escape from macrophage microbicide response. Although the results of some immunological parameters were similar in the surveyed systems, the oscillations occurred during the production of nitric oxide may contribute significantly to the survival of Staphylococcus aureus.

INTRODUÇÃO: Modificações nas paredes celulares das cepas de Staphylococcus aureus relacionadas com o fenótipo de multirresistência poderiam influenciar seus mecanismos de evasão frente à resposta imune? OBJETIVO: Avaliar a resposta microbicida e a sobrevivência de macrófagos alveolares após infecção in vitro com Staphylococcus aureus meticilina sensível/resistente. MATERIAL E MÉTODOS: Utilizaram-se 20 ratos adultos, machos, albinos e da linhagem Wistar. Os macrófagos alveolares foram obtidos após procedimento cirúrgico de traqueostomia, por meios da coleta do lavado broncoalveolar. Os macrófagos alveolares foram cultivados na proporção de 1:1 células/ml de Roswell Park Memorial Institute (RPMI)/poço e isolados pela capacidade de adesão à placa. Para avaliação de parâmetros imunológicos, foram estabelecidos quatro sistemas: controle negativo, controle positivo, S. aureus sensível a meticilina (MSSA) e S. aureus resistente à meticilina (MRSA). RESULTADOS: Ao comparar os sistemas de MSSA e MRSA, não foi observada diferença no índice de aderência, na taxa de fagocitose, na produção do ânion superóxido e na viabilidade dos macrófagos. Ao analisar a cinética de óxido nítrico, houve menor produção média desse radical para o MRSA quando comparado com o MSSA, no período de 4 a 10 horas de incubação das culturas celulares. Entretanto, após 12 horas, não foi detectada divergências entre esses sistemas. CONCLUSÃO: Sugere-se que a resistência à meticilina poderá ser um fator que influenciará a capacidade de evasão da bactéria à resposta microbicida dos macrófagos. Apesar dos resultados de alguns parâmetros imunológicos terem sido similares entre os sistemas analisados, as oscilações ocorridas durante a produção do óxido nítrico poderão contribuir de forma importante para a sobrevivência da bactéria Staphylococcus aureus.

Desnutrição neonatal e produção de IFN-γ IL-12 e IL-10 por macrófagos/linfócitos: estudo da infecção celular, in vitro, por Staphylococcus aureus meticilina sensível e meticilina resistente / Early malnutrition and production of IFN, IL-12 and IL-10 by macrophages/lymphocytes: in vitro study of cell infection by methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus

OBJETIVO: Avaliar a influência da desnutrição neonatal sobre a produção de Interferon gama, Interleucina-12 e Interleucina-10 em cultura de macrófagos alveolares e linfócitos infectados, in vitro, com Staphylococcus aureus sensível/resistente à meticilina. MÉTODOS: Ratos machos Wistar foram amamentados por mães cuja dieta, durante a lactação, continha 17% de proteína no grupo nutrido e 8% no grupo desnutrido. Após desmame, ambos os grupos receberam a dieta normoproteica. Os macrófagos foram obtidos após traqueostomia, através da coleta do lavado broncoalveolar. Para obtenção dos linfócitos, foi realizado o procedimento cirúrgico de punção cardíaca. Após o isolamento dos diferentes tipos celulares, procedeuse à realização dos estímulos com as cepas de estudo. A dosagem das citocinas foi realizada pelo método de Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, a partir de amostras coletadas do sobrenadante das culturas após 24 horas de incubação. RESULTADOS: A desnutrição acarretou diminuição do crescimento ponderal, redução na produção de Interferon gama em cultura de macrófagos alveolares e linfócitos e diminuição na produção de Interleucina-12 em cultura de macrófagos alveolares. Apenas a produção de Interferon gama e Interleucina-10 em cultura de macrófagos alveolares apresentou diferença entre as cepas analisadas, em ambos os grupos estudados. CONCLUSÃO: O modelo de desnutrição neonatal produziu sequela no peso corporal e reduziu a produção de citocinas próinflamatórias (Interleucina-12 e Interferon gama), indicando que esse modelo de desnutrição pode comprometer a resolução de um processo infeccioso. A cepa de Staphylococcus aureus resistente à meticilina estimulou uma maior produção de Interferon gama e Interleucina-10 por macrófagos alveolares, o que sugeriu estimulação imunológica mais intensa, por essa cepa, nesse tipo celular especificamente.

OBJECTIVE: The present study assessed the influence of neonatal malnutrition on the production of interferon gamma, interleukin-12 and interleukin-10 in cultured macrophages and lymphocytes infected in vitro with methicillin-sensitive or methicillin-resistant Staphylococcus aureus. METHODS: Male Wistar rats were suckled by mothers fed during lactation a chow containing 17% protein for the nourished group and 8% for the undernourished group. After weaning, both groups received a normal diet in terms of protein content. The macrophages were obtained by bronchoalveolar lavage after tracheostomy. Cardiac puncture was used for the collection of lymphocytes. After isolation of different cell types, the challenge with the different strains was performed. Cytokines were measured by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA), using samples collected from the culture supernatant after an incubation period of 24 hours. RESULTS: Malnutrition let to slow weight gain, low interferon gamma in cultured alveolar macrophages and lymphocytes and low production of interleukin-12 in cultured alveolar macrophages. Only interferon gamma and interleukin-10 in cultured alveolar macrophages differed between the two groups and study strains. CONCLUSION: The neonatal malnutrition model used impaired weight gain and reduced production of proinflammatory cytokines (interleukin-12 and interferon gamma), indicating that protein malnutrition may result in an inability to fight infections. The methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain stimulated macrophages to produce interferon gamma and interleukin-10, suggesting that this strain better provokes the immune system, specifically for this cell type.